北京2020年6月15日 /美通社/ -- 2020年新冠疫情全球肆虐，但疫情并未阻擋血液界學者對學術研究和交流分享的熱情。承載眾多看點的第25屆歐洲血液學協會（EHA）年會，在大家的期待中采用線上虛擬會議的模式如期舉行。
作為歐洲血液學領域規模最大的國際會議，EHA年會每年吸引來自全球100多個國家的上萬名專業人士與會，一起分享、探討有關血液學的創新理念及最新的科學和臨床研究成果，能夠登上EHA舞臺，表示在血液學領域具有較高的學術水平。此次，陸道培醫學團隊有3項研究成果亮相EHA大會，向世界展示和分享陸道培醫學團隊最新科研成果。
研究一：使用cCD79a設門的多色流式可以有效監測CD19-CAR-T治療B-ALL后MRD，并且預測橋接移植的預后
第一作者流式細胞室陳曼醫師的文章“Multicolor Flow Cytometry Panel with cCD79A Gating to Detect Minimal Residual Disease in Patients with B-Lymphoblastic Leukemia/Lymphoma Post Anti-CD19 CAR-T Therapy Bridging to Allo-HSCT”（胞漿CD79a抗體設門多色流式法監測CD19-CAR-T橋接異基因移植治療難治復發急性B淋巴細胞白血病）（摘要號：S113）被選為口頭發言。
陸道培醫療集團在CD19嵌合抗原受體T(CD19-CAR-T)細胞治療急性B淋巴細胞白血病（B-ALL）中有豐富的經驗，尤其是橋接異基因造血干細胞移植，挽救了無數難治復發患者生命。這類疾病的病情監測、療效評價、預后評估中，流式細胞術（FCM）微小殘留病變（MRD）檢測技術起到不可或缺的作用。
但是常規的B-ALL的MRD多色流式檢測方法均使用CD19設B細胞門，而CD19-CAR-T治療后，由于13-60%的MRD陽性或者復發患者腫瘤細胞會或多或少丟失CD19，故不再適合使用傳統方案監測MRD。以王卉主任、陳曼醫師為代表的團隊，探討了陸道培醫療集團流式細胞室使用胞漿CD79a（cCD79a）抗體設門多色流式細胞術檢測MRD方法在CD19-CAR-T治療中的有效性，并研究其在輸注后橋接異基因移植（allo-HSCT）整個治療過程中的評價療效及監測預后的作用。
實驗中分別選取10例B-ALL完全緩解（CR）患者的骨髓標本及10例B-ALL MRD陽性的骨髓標本，同時使用新方案與經典方案進行檢測，采用線性回歸方法進行結果一致性分析，證實兩種方案的一致性好。
然后選取2016年6月~2017年5月于河北燕達陸道培醫院經CD19-CAR-T細胞輸注后橋接移植的59例患者，使用新方案進行骨髓MRD監測，中位隨訪24月。其中51例（86.44%）患者CD19-CAR-T后FCM-MRD陰性，8例（13.56%）患者CAR-T細胞輸注后MRD陽性或者復發。兩組病例均在中位時間1-2個月左右進行了異基因造血干細胞移植。
經單因素卡方檢驗分析，CD19-CAR-T后移植前以及移植后FCM-MRD均與移植預后有強相關性（分別為P<0.0001，P=0.000）。59例患者中，移植后復發總計9例，其中7例死亡，4例為移植前FCM-MRD陽性患者（占帶瘤移植組50%，4/8例），3例為FCM-MRD陰性移植患者（占MRD陰性移植組5.88%，3/51例），2例復發后緩解均為移植前FCM-MRD陰性患者。
結論認為，使用cCD79a設門的多色流式B-ALL檢測MRD方案，可以有效監測CD19-CAR-T后MRD，并且預測CD19 CAR-T后橋接移植的預后。
研究二：流式細胞術微球法檢測24種細胞因子在CAR-T治療中的應用
第一作者細胞凍存室王東出醫師的文章“EP403 Monitoring 24 Cytokines by Cytometric Bead Array during the Chimeric Antigen Receptor T Cells Treatment”（流式細胞術微球法檢測24種細胞因子在嵌合抗原受體T細胞治療中的應用）被選為墻報展示。
研究表明在CAR-T治療中，多種細胞因子在細胞因子釋放綜合征（CRS）或者細胞因子風暴中起到重要作用，因此細胞因子檢測是評價CAR-T副作用的重要指標。流式細胞微球陣列技術（CBA）是最近發展起來的一項新技術，與傳統的ELISA方法相比，具有靈活、快速、高性價比、節約標本等優點。以王卉主任、王東出醫師為代表細胞凍存室團隊設計了一項新的24種細胞因子組合方案，使用CBA方法評價了其在CAR-T患者的腦脊液和外周血細胞因子檢測中的作用。
他們首先進行了方法學對照性研究，收集了29例健康志愿者的外周血，25例回輸CD19-CAR-T細胞后的ALL患者外周血標本，分別使用ELISA（Quantikine,RND）檢測四種常見細胞因子（IL-6、IL-10、IFN-γ、可溶性CD25（sCD25）），與CBA（北京曠博公司）方法進行了比較。結果表明，每種技術均有很好的重復性，兩者相關性很好。
為了研究CAR-T后細胞因子變化曲線，研究者選取的25例CAR-T治療患者每人至少采集了5個時間點。由于標本量的問題，ELISA方法只做了正常對照和患者的外周血標本，CBA方法除了檢測外周血標本，還對41例未做CAR-T的完全緩解患者腦脊液標本和15例CART治療后腦脊液標本進行了檢測。
結果表明，在健康對照和患者外周血標本組，雖然IL-6和sCD25檢測的絕對值兩種技術有差異，但是兩種方法均可滿意顯示CAR-T治療后細胞因子變化曲線，一致性很高。尤為重要的是，CBA技術檢測腦脊液和外周血均有臨床實用性強的特點。CBA方法可以一次完成24種細胞因子的檢測，因此節約標本，讓腦脊液這種微量標本檢測成為可能；各種標本的檢測中都解決了ELISA方法必須批量檢測，隨意性差的特點，相比之下檢測時間短、性價比高，不論大批量還是急診隨機性標本都適合。
2020年2月起，陸道培醫療集團已經將CBA方法24種細胞因子檢測技術全面推向臨床，這項技術不僅可用于CAR-T治療患者的監測，同時在各種良、惡性疾病的診斷、治療，感染的免疫指標評價，移植物抗宿主病、CMV、EBV或者其他感染等移植后并發癥的診斷、評價，噬血綜合征等特殊免疫狀態的監測與防治中，都起到極為重要的作用。
研究三：CD69在AML微小殘留病變檢測中的意義
第一作者流式細胞室宮美維醫師的文章“The Clinical Significance of CD69 Detection in Minimal Residual Disease of Patiens with Acute Myeloid Leukemia”（CD69在急性髓系白血病微小殘留病變檢測中的意義）被選為大會論文集。
微小殘留病變（MRD）是惡性血液病重要的疾病監控、判斷預后、指導治療的指標，目前臨床常用的靈敏度較高的檢測方法包括實時定量聚合酶鏈反應（RQ-PCR）、多色流式（MFC）等。MFC通過分析細胞抗原表達情況區分正常細胞與異常細胞，具有快速、性價比高、覆蓋范圍廣、靈敏度高、特異性高的特點。目前流式細胞術對急性髓系白血病（AML）檢測敏感性為10-3~10-4，雖然文獻報道覆蓋率為80-95%，但是臨床工作中低比例（低于0.1%）MRD檢測、以及缺乏特異性標志的標本檢測仍舊遇到瓶頸。以王卉主任、宮美維醫師為代表的流式細胞室團隊進行了一項研究，探討CD69在急性髓系白血病（AML）微小殘留病變（MRD）檢測中的臨床意義。
方法：采用多參數流式細胞術檢測40例AML（包括初治AML及治療后MRD）患者骨髓中CD69的表達率及表達強度，另選取10例MRD陰性的AML患者作為對照組。對照組患者經細胞形態學、流式細胞術、分子及遺傳學檢查證實其骨髓完全緩解狀態。CD69表達強度計算，采用每個患者同一管標本中CD69陰性的淋巴細胞作為校準參照，分別計算對照組正常髓系原始細胞和實驗組惡性髓系幼稚細胞CD69中位熒光強度（MFI）與其CD69陰性淋巴細胞CD69MFI比值（MFIR）。
結果：CD69在正常髓系原始細胞中不表達。在40例AML患者中，有17例（42.5%）CD69表達陽性或部分陽性。陽性病例腫瘤細胞MFIR為15.13+9.58，與對照組比較，具有顯著性差異（P<0.01）。CD34+CD117+、CD34-/CD117+組為正常髓系原始細胞組，CD69陽性組和CD69陰性組為AML腫瘤細胞組。CD69陽性組MFIR高于CD69陰性組和正常對照組（P<0.01），后兩者無顯著性差異。
結論：CD69可以作為一個新的AML特異性抗原加入MRD檢測方案中，并有望成為嵌合抗原受體修飾的T細胞（CAR-T）治療AML的一個新靶點。
三篇文章的通訊作者均為陸道培醫療集團檢驗科副主任、流式細胞室主任、信納克實驗室（CAP認證實驗室）主任王卉教授。
陸道培醫療集團檢驗科副主任、流式細胞室主任、信納克實驗室主任（副院長級）。中國中西醫結合學會檢驗專委會流式專委會主任委員；北京醫學檢驗學會血液和體液檢驗分會副會長；中國非公立醫療機構協會血液委員會常委；中國臨床流式聯盟常委；中國抗癌協會淋巴瘤學組、中國血液免疫學會流式學組、中國生物工程學會細胞分析專委會、北京細胞生物學會等諸多學會常委、委員和特聘專家。從事流式臨床診斷19年，獨立簽發30余萬份報告；全國28個省（包括臺灣）講座600多場，為全國26個省（包括臺灣）百家三甲醫院培訓了進修醫。
科研創新，競勝之道。陸道培醫療集團作為目前國內最大的造血干細胞移植中心，擁有專業的病理和檢驗醫學團隊，各實驗室之間緊密協作，及時為臨床一線醫生提供精準的檢驗報告，為患者的正確診斷和治療爭取寶貴的時間，其檢驗報告的準確性和易讀性得到業內的廣泛認可。
